人白介素ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素,再和HRP標記的白介素抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。
人白介素ELISA試劑盒使用時需要注意的要點:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間較好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,較好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請較后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
人白介素ELISA試劑盒的計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內與批見應分別小于9%和11%